Développement d'outils analytiques basés sur la spectrométrie de masse pour le suivi d'interactions enzyme-ligand dans le domaine de la santé
Les enzymes et leur diversité d actions sont appréciées dans des domaines d applications variés allant del agroalimentaire à la thérapeutique. Ainsi, une attention toute particulière est portée à leur étude afin d améliorer uneaction (contre le vieillissement de la peau, antivirale, anticancéreuse )...
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| Auteur principal: | |
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| Autres auteurs: | , , , , |
| Format: | Thèse numérique |
| Langue: | Français |
| Publié: |
2017.
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| Sujets: | |
| Accès en ligne: | Accès au texte intégral https://theses.univ-orleans.fr/public/2017ORLE2051_vm.pdf http://www.theses.fr/2017ORLE2051/abes https://theses.hal.science/tel-01952774 |
| Note: |
Titre provenant de l'écran-titre Ecole(s) Doctorale(s) : École doctorale Santé, Sciences Biologiques et Chimie du Vivant (Centre-Val de Loire ; 2012-....) Partenaire(s) de recherche : Institut de chimie organique et analytique (Orléans ; 2012-....) (Laboratoire) Autre(s) contribution(s) : Christine Enjalbal (Président du jury) ; Benoît Maunit, Christine Enjalbal, Olivier Laprévote, Patrick Emond, Carlos Afonso, David Da Silva (Membre(s) du jury) ; Olivier Laprévote, Patrick Emond (Rapporteur(s)) |
| Autres localisations: | Voir dans le Sudoc |
| Variante du titre: | Development of analytical tools-based on mass spectrometry for the monitoring of enzyme-ligand interactions in the healthcare field |
| Résumé: | Les enzymes et leur diversité d actions sont appréciées dans des domaines d applications variés allant del agroalimentaire à la thérapeutique. Ainsi, une attention toute particulière est portée à leur étude afin d améliorer uneaction (contre le vieillissement de la peau, antivirale, anticancéreuse ) ou un procédé de synthèse. Ce projet derecherche s inscrit dans une démarche de développement d outils analytiques basés sur la spectrométrie de masse,permettant le suivi rapide et sensible d interactions enzyme-ligand.Dans une première étude, l approche TLC couplée à une détection par UV a été évaluée pour la déterminationde constantes enzymatiques de l enzyme invertase. Cette approche couplée à un MALDI/TOF MS a permis d identifierdes substrats spécifiques de l invertase au sein d extraits de plantes. Pour preuve de concept, l interactioncellobiohydrolase II ligand est présentée dans le cadre de l identification d inhibiteur par TLC-MALDI/TOF et TLCENALDIMS.En seconde étude, nos travaux ont porté sur la caractérisation directe de différentes enzymes kinases, puis auxsuivis des réactions de phosphorylation de nucléosides /tides endogènes. Ces études, basées sur des approches offline (Flow Injection Analysis, FIA) et on-line (Frontal Affinity Chromatography, FAC) couplées à unspectromètre de masse haute résolution, ont été réalisées au moyen de ces kinases libres et immobilisées. Dans le cadrede la recherche de nouveaux candidats médicamenteux antiviraux, le suivi d une phosphorylation spécifique desmolécules de synthèse, au regard de souches humaine ou virale de kinase, a également été évalué par ces deuxméthodologies. Enzymes are very appreciated and useful in various application fields from agri-business to therapeutic due to theirdiversity of actions. Therefore, their action mechanisms are widely studied in order to enhance an action (anti-aging ofskin, antiviral, antitumorous) or a synthesis process. This research project is part of the approach to propose analyticaltools based on mass spectrometry, allowing rapid and sensitive follow-up of enzyme-ligand interactions.In a first study, the Thin-Layer Chromatography (TLC) approach coupled with UV detection was evaluated forthe determination of invertase kinetic constants. This approach coupled with a MALDI / TOF-MS led to theidentification of invertase substrates in plant extracts. As a proof of concept, the cellobiohydrolase II - ligand interactionwas presented in the framework of the identification of inhibitor by TLC-MALDI / TOF and TLC-ENALDI MS.In the second study, our work aimed at developing a direct method for the determination of kinetic parametersof kinases and following-up the phosphorylation reactions of endogenous nucleosides / tides. These studies, based on off-line (Flow Injection Analysis, FIA) and on-line (Frontal Affinity Chromatography, FAC) approaches coupledwith a high-resolution mass spectrometer, were carried out using free and immobilized kinases. In the context of thesearch for new antiviral drug candidates, a specific phosphorylation of synthetic molecules regards to human or viralkinase was also evaluated by these both approaches. |
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| Description: | Titre provenant de l'écran-titre Ecole(s) Doctorale(s) : École doctorale Santé, Sciences Biologiques et Chimie du Vivant (Centre-Val de Loire ; 2012-....) Partenaire(s) de recherche : Institut de chimie organique et analytique (Orléans ; 2012-....) (Laboratoire) Autre(s) contribution(s) : Christine Enjalbal (Président du jury) ; Benoît Maunit, Christine Enjalbal, Olivier Laprévote, Patrick Emond, Carlos Afonso, David Da Silva (Membre(s) du jury) ; Olivier Laprévote, Patrick Emond (Rapporteur(s)) |
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