Transfert de gènes par vecteurs synthétiques : optimisation du transport intracellulaire et délivrance dans le noyau d'un plasmide ADN
Le transfert de gène est l une des stratégies majeures de la thérapie génique visant à guérir des pathologies le plus souvent d origine génétique. Contrairement aux vecteurs viraux, les vecteurs non viraux tels que les polymères cationiques et lipides cationiques sont prometteurs pour le transfert d...
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| Andre forfattere: | , , , , , |
| Format: | Thèse numérique |
| Sprog: | Français |
| Udgivet: |
2021.
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| Fag: | |
| Online adgang: | Accès au texte intégral https://theses.univ-orleans.fr/public/2021ORLE3191_va.pdf http://www.theses.fr/2021ORLE3191/abes https://theses.hal.science/tel-03984710 |
| Kommentar: |
Titre provenant de l'écran-titre Ecole(s) Doctorale(s) : École doctorale Santé, Sciences Biologiques et Chimie du Vivant (Centre-Val de Loire ; 2012-....) Partenaire(s) de recherche : Centre de biophysique moléculaire (Orléans ; 1967-....) (Laboratoire) Autre(s) contribution(s) : Chantal Pichon (Président du jury) ; Guy Zuber, Tristan Montier, Philippe Guégan (Membre(s) du jury) ; Marie-Pierre Rols, Guy Zuber (Rapporteur(s)) |
| Autres localisations: | Voir dans le Sudoc |
| Variante du titre: | Gene transfer by synthetic carriers :, optimization of intracellular transport and delivery in nucleus of plasmid DNA |
| Summary: | Le transfert de gène est l une des stratégies majeures de la thérapie génique visant à guérir des pathologies le plus souvent d origine génétique. Contrairement aux vecteurs viraux, les vecteurs non viraux tels que les polymères cationiques et lipides cationiques sont prometteurs pour le transfert de gènes dans les cellules puisqu ils sont moins immunogènes, moins couteux et illimités dans la taille du transgène qu ils transportent. Cependant, leur efficacité de transfection reste faible principalement à cause d un transport intracellulaire et d une délivrance dans le noyau limités. Les travaux réalisés dans cette thèse visent à maximiser l efficacité de transfection en assemblant des signaux moléculaires à un ADN plasmidique (ADNp). Ces signaux moléculaires sont impliqués dans la migration de l ADN à travers le cytosol en utilisant un peptideP4 se liant indirectement à la dynéine et dans le transport nucléaire de l ADN en utilisant des séquences 3NFreconnues par le facteur NFkB. Ces travaux sont focalisés sur l optimisation de plasmides contenant le gène codant la protéine dystrophine ou CFTR, dans le contexte de la dystrophie musculaire de Duchenne et de la mucoviscidose, respectivement. Pour cela, une stratégie de greffage entre un peptide et différents plasmides ADN a été mise au point en s appuyant sur la formation de triples hélices entre un oligonucléotide conjugué au peptide P4 et des séquences oligopurines oligopyrimidines insérées dans les ADNp. L efficacité de cette stratégie a été évaluée in cellulo et in vivo. Après l injection hydrodynamique dans la veine saphène des pattes postérieures de souris d un plasmide codant le gène de la luciférase, les mesures de l activité de la luciférase dans les muscles squelettiques par bioluminescence sont en faveur d une amélioration du transfert de gène dans des tissus musculaires lorsque le peptide P4 est associé au plasmide ADN par une triple hélice. Gene transfer is one of the major strategies of gene therapy to cure pathologies mostly of genetic origin. Unlike viral vectors, non-viral vectors such as cationic polymer and cationic lipids are promising for gene transfer since they are less immunogenic, less expensive and they can carry an unlimited size of the transgene. However, their transfection efficiency remains low mainly due to a limited intracellular transport and delivery to the nucleus of plasmid DNA coding the transgene. The works performed in this thesis aims to maximize transfection efficiency by assembling molecular signals to DNA plasmid (pDNA). These molecular signals favour the migration of pDNA through the cytosol by using P4 peptide indirectly binding to dynein and in the nuclear transport of pDNA using 3NF sequences recognized by the NFkB factor. The work is focused on theoptimization of plasmids coding for the gene of the dystrophin or CFTR, in the context of Duchenne muscular dystrophy and Cystic fibrosis, respectively. For this purpose, a grafting strategy between a peptide and different DNA plasmids was developed based on the formation of triple helix between an oligonucleotide- P4 peptide conjugate with oligopurines oligopyrimidines sequences inserted in pDNA sequence. The efficiency of this strategy was evaluated in cellulo and in vivo. After hydrodynamic injection of a plasmid encoding the luciferase gene into the saphenous vein of the hind legs of mice, measurements of luciferase activity in skeletal muscle by bioluminescence favour an improvement in gene transfer into muscle tissue when the P4 peptide is associated with the DNA plasmid by a triple helix. |
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| Emne beskrivelse: | Titre provenant de l'écran-titre Ecole(s) Doctorale(s) : École doctorale Santé, Sciences Biologiques et Chimie du Vivant (Centre-Val de Loire ; 2012-....) Partenaire(s) de recherche : Centre de biophysique moléculaire (Orléans ; 1967-....) (Laboratoire) Autre(s) contribution(s) : Chantal Pichon (Président du jury) ; Guy Zuber, Tristan Montier, Philippe Guégan (Membre(s) du jury) ; Marie-Pierre Rols, Guy Zuber (Rapporteur(s)) |
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