A catch-and-release purification method to simplify the synthesis of cysteine-rich peptides
Bien que la synthèse peptidique en phase solide (SPPS) soit maintenant une technique mature et très largement popularisée pour des peptides simples, certaines séquences restent encore compliquées à produire, comme les peptides riches en ponts disulfure (DRPs). Ces produits naturels, ligands sélectif...
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| Auteur principal: | |
|---|---|
| Autres auteurs: | , , , |
| Format: | Thèse numérique |
| Langue: | Anglais |
| Publié: |
2017.
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| Sujets: | |
| Accès en ligne: | Accès au texte intégral https://theses.univ-orleans.fr/public/2017ORLE2050_va.pdf http://www.theses.fr/2017ORLE2050/abes https://theses.hal.science/tel-01952739 |
| Note: |
Titre provenant de l'écran-titre Ecole(s) Doctorale(s) : École doctorale Santé, Sciences Biologiques et Chimie du Vivant (Centre-Val de Loire ; 2012-....) Partenaire(s) de recherche : Centre de biophysique moléculaire (Orléans ; 1967-....) (Laboratoire) Autre(s) contribution(s) : Josef Hamacek (Président du jury) ; Agnès F. Delmas, Vincent Aucagne, Josef Hamacek, Laurent Devel, Sophie Faure, Pascal Kessler (Membre(s) du jury) ; Laurent Devel, Sophie Faure (Rapporteur(s)) |
| Autres localisations: | Voir dans le Sudoc |
| Variante du titre: | Développement d une méthode de purification non-chromatographique de peptides riches en cystéine par immobilisation temporaire |
| LEADER | 06419nam a22004217a 4500 | ||
|---|---|---|---|
| 001 | 693243 | ||
| 008 | 181212s2017 xxe ||| |||| 00| 0 eng d | ||
| 009 | PPN232694176 | ||
| 041 | 0 | |a eng |b fre |b eng | |
| 082 | |a 547.7 | ||
| 084 | |a 540 | ||
| 100 | 1 | |a Casas Mora, Alba, |d 1989- | |
| 240 | 1 | 0 | |a Développement d une méthode de purification non-chromatographique de peptides riches en cystéine par immobilisation temporaire |
| 245 | 1 | 0 | |a A catch-and-release purification method to simplify the synthesis of cysteine-rich peptides |c Alba Casas Mora ; sous la direction de Agnès F. Delmas et de Vincent Aucagne. |
| 256 | |a Données textuelles | ||
| 260 | |c 2017. | ||
| 500 | |a Titre provenant de l'écran-titre | ||
| 500 | |a Ecole(s) Doctorale(s) : École doctorale Santé, Sciences Biologiques et Chimie du Vivant (Centre-Val de Loire ; 2012-....) | ||
| 500 | |a Partenaire(s) de recherche : Centre de biophysique moléculaire (Orléans ; 1967-....) (Laboratoire) | ||
| 500 | |a Autre(s) contribution(s) : Josef Hamacek (Président du jury) ; Agnès F. Delmas, Vincent Aucagne, Josef Hamacek, Laurent Devel, Sophie Faure, Pascal Kessler (Membre(s) du jury) ; Laurent Devel, Sophie Faure (Rapporteur(s)) | ||
| 502 | |a Thèse de doctorat. Chimie. Orléans. 2017 | ||
| 520 | |a Bien que la synthèse peptidique en phase solide (SPPS) soit maintenant une technique mature et très largement popularisée pour des peptides simples, certaines séquences restent encore compliquées à produire, comme les peptides riches en ponts disulfure (DRPs). Ces produits naturels, ligands sélectifs d un grand nombre de cibles thérapeutiques, sont des outils pharmacologiques de premier ordre et sont considérés comme de bons candidats médicaments. La proportion importante de cystéines dans leur séquence (plus de 10%) leur confère des propriétés remarquables, mais limite aussi leur synthèse,conduisant à des purifications HPLC délicates, associées à des rendements faibles et une pureté médiocre.Dans l optique de simplifier la production de DRPs par voie chimique, notre but est de proposer une méthode de purification non-chromatographique. Pour cela, nous avons développé un bras N-terminal conçu pour être complètement compatible avec les peptides riches en cystéines: Boc-Cys(Trt)-1-{6-[1,3-diméthyl-2,4,6(1H,3H,5H)trioxopyrimidine-5-ylidène]hexyle}. A la fin de l élongation sur support solide, ce bras est introduit sélectivement à l'extrémité N-terminale du peptide cible, sans réagir avec les peptides tronqués acétylés qui constituent les principales impuretés de la SPPS. Après coupure de la résine SPPS, le peptide cible est immobilisé sur un second support solide par le biais d une réaction de ligation chimique native(NCL). Les peptides tronqués sont alors éliminés par simple filtration, puis le peptide cible est relargué en solution par coupure du bras N-terminal. Ayant comme objectif d élargir par la suite notre stratégie à la synthèse de très longs DRPs via l assemblage de multiples segments peptidiques par NCLs successives enphase solide, nous avons étudié en détail la stabilité et les conditions de coupure du bras.La méthode a été appliquée à la purification de deux séquences naturelles riches en cystéines et biologiquement pertinentes : AvBD2 (36 AA), un peptide antimicrobien appartenant à la famille des b défensines aviaires et Bv8 (77 AA) un peptide d amphibien de la famille des prokinéticines. | ||
| 520 | |a Although solid phase peptide synthesis (SPPS) is a mature and widely popularized technique for simple peptides, some sequences are still complicated to produce, such as disulfide-rich peptides (DRPs). These natural products are able to selectively bind a wide number of therapeutically relevant targets, hence they are considered as promising drug candidates and pharmacological tools. The large proportion of cysteines in their sequence (more than 10%) confers them remarkable properties, but also limits their synthesis, lead ingto delicate HPLC purifications associated with low yields and poor purity.With the aim to simplify the chemical production of DRPs, we have developed an N-terminal linker: Boc-Cys(Trt)-1-{6-[1,3-dimethyl-2,4,6(1H,3H,5H)trioxopyrimidine-5-ylidene]hexyl}, which can be used for non chromatographiccatch-and-release purifications. It has been designed to be completely compatible with unprotected cysteine-containing peptides. Following solid phase elongation, this linker is selective lyintroduced at the N-terminus of the target peptide, leaving unreacted truncated acetylated peptides which are the main co-products of SPPS. After cleavage from the SPPS resin, the target peptide is immobilized on a second solid support through native chemical ligation (NCL). The truncated peptides are then removed by simple filtration. Cleavage of the linker finally releases the purified peptide into solution.Having in mind the future extension our strategy to the synthesis of very long DRPs through successive solid-supported NCLs of multiple peptide segments, we have studied in detail the stability and cleavage conditions of the N-terminal linker.To explore the scope and limitations of the method, it has been applied to the purification of two biologically-relevant cysteine-rich peptide sequences: chicken AvBD2 (36 AA), a b defensin antimicrobial peptide, and Bv8 (77 AA), a prokineticin-like peptide from yellow-bellied toad. | ||
| 538 | |a Configuration requise : un logiciel capable de lire un fichier au format : PDF | ||
| 650 | |a Protéines |x Composition chimique | ||
| 650 | |a Protéines immobilisées | ||
| 650 | |a Peptides | ||
| 650 | |a Thèses et écrits académiques | ||
| 700 | 1 | |a Delmas, Agnès F., |c biophysicienne. |4 ths |4 opn | |
| 700 | 1 | |a Aucagne, Vincent, |d 1975-...., |c auteur en chimie. |4 ths |4 opn | |
| 700 | 1 | |a Hamacek, Josef, |d 19..- |4 opn | |
| 700 | 1 | |a Faure, Sophie, |d 19..-...., |c chimiste. |4 opn | |
| 710 | 2 | |a Université d'Orléans. |4 dgg | |
| 856 | 4 | |q PDF |s 14463613 |u http://www.theses.fr/2017ORLE2050/document |z Accès au texte intégral | |
| 856 | 4 | |u https://theses.univ-orleans.fr/public/2017ORLE2050_va.pdf | |
| 856 | 4 | |u http://www.theses.fr/2017ORLE2050/abes | |
| 856 | 4 | |u https://theses.hal.science/tel-01952739 | |
| 997 | |0 693243 |1 Thèse numérique |a Ressource numérique |b INSA |b ENSA |c 0/Bibliothèque numérique/ |c 1/Bibliothèque numérique/Autre ressource numérique/ | ||